技术支持微生物限度测试
一、实验目的
用于测定抗菌产品体外抑制细菌生长效力的试验,也称为抑菌试验。通过该实验,可以测定其最低抑菌浓度,用以评价该产品的抑菌性能,这是抗菌产品的最基本的效力数据。
二、菌种选择
美国化妆品、洗涤剂和香精协会(CTFA)推荐的菌种,是极具代表性的,按CTFA标准做微生物挑战试验通过,全世界公认3年保质期。
类别 名称 属性 特点 对皮肤的潜在威胁
细菌 E.Coli (大肠杆菌) 革兰氏阴性 发酵乳糖产酸并产气,需氧或兼性厌氧菌 引起皮肤继发性感染
S.Aureus (金黄色葡萄球菌) 革兰氏阴性 血浆凝固酶阳性,产酸不产气,需氧或兼性厌氧球菌 引起脓胞疮、毛囊炎、疖等严重的有皮肤烫伤样皮炎症状
P.Aeruginosa (绿脓杆菌) 革兰氏阴性 氧化酶阳性,产生绿脓菌素。还能液化明胶,还原硝酸盐为亚硝酸盐,专性需氧菌 入眼可引起角膜化脓性溃疡,入伤处可化脓;屏障破坏引起皮肤感染;严重可引起败血症
真菌 C.Albicans (白色念球菌) 霉菌 霉菌产生霉斑,有霉臭味,为需氧型真菌 引起皮肤过敏性皮炎及多种真菌性皮肤病
A.Niger (黑曲霉) 酵母菌 可发酵产酸,分泌毒素,兼性厌氧型菌 引起皮肤过敏性皮炎及多种真菌性皮肤病
三、实验方法
方法1. 微量肉汤稀释法
实验原理:最小抑菌浓度(MIC):抑制微生物生长所需的最低浓度,根据MIC值大小判断抑菌效力。
实验步骤:将防腐剂加入液体培养基(如肉汤)中,用等系列稀释法稀释防腐剂成不同浓度的液体,接种微生物并进行培养,观察微生物生长情况。
评价标准:微生物未生长时防腐剂浓度,即为最小抑菌浓度。MIC值越小,代表该物质的抑菌效果就越好。
A
 
M0 代表肉汤中加入防腐剂和菌液,共培养前;
M1 代表培养后,防腐剂浓度大于0.06后,溶液均澄清;
结果分析:该产品MIC值为0.06
 
方法2.纸片扩散法(K-B法),E试验--抑菌圈测试、抑菌带测试
实验原理:是评价一种防腐剂抑菌作用的最简单的实验的方法,根据抑菌圈大小判断抑菌效力。
实验步骤:试验细菌或霉菌在适合的培养基上, 经培养后能旺盛生长。若培养基平板中央放有经防腐剂处理的滤纸圆片向周围渗透, 可形成抑菌圈。量出抑菌圈直径的大小, 可以判断出防腐剂的效力。
评价标准:抑菌圈直径越大, 表明防腐剂的效力越好。
  • B
    M0 无抑菌圈
    M1 抑菌圈明显
    结果分析: M1 的抑菌效果显著高于M0;
    M0 该产品无或抑菌效果非常差
  • C
    M0 抑菌带上有大量菌生长
    M1 抑菌带上无菌
    结果分析: M1 的抑菌效果显著高于M0;
    M0 该产品抑菌效果非常差
 
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